SARS-CoV-2 핵산 테스트 키트

사용 목적:

SARS-CoV-2 핵산 테스트 키트는 비인두 면봉, 구인두 면봉 및 객담에서 COVID-19 핵산의 정성적 검출에 적용됩니다. 검사 결과는 감염 또는 의심 환자에 대한 분자진단의 근거를 제공하며, 임상 진단의 유일한 기준으로 사용되어서는 안 됩니다.

재료:

테스트 절차:

A. 샘플 준비

추출된 RNA는 SARS-CoV-2 Nucleic Acid Test kit의 출발 물질입니다.

중요: 각 핵산 추출 절차는 하나의 양성 대조군(40 μL, 멸균 식염수/PBS로 원하는 부피로 희석) 및 하나의 음성 대조군(40 μL, 멸균 식염수/PBS로 원하는 부피로 희석)과 동시에 수행해야 합니다.

다음 상용 핵산 추출 키트를 사용하는 것이 좋습니다. PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit(Invitrogen); 바이러스 RNA 미니 키트(QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA 키트(TIANGEN);

B. 반응 믹스 설정

1. 모든 시약과 시료는 완전히 해동하고 완전히 혼합한 후 실온(대략 18~25도 범위)에서 잠시 원심분리한 후 사용하십시오.

2. 적절한 크기의 폴리프로필렌 마이크로원심분리기 튜브에 필요한 양의 반응 혼합물을 준비합니다.

3. 적절한 광학 96-웰 반응 플레이트 또는 적절한 광학 반응 튜브의 필요한 각 웰에 반응 혼합물 25µL를 피펫으로 넣습니다.

C. 템플릿 추가

1. 샘플/양성 대조군/음성 대조군에서 추출한 RNA 5μL를 추가합니다. 총 부피는 30μL입니다.

2. 피펫팅을 위아래로/Vortex하여 반응 믹스와 샘플 및 컨트롤을 철저히 혼합합니다.

3. 적절한 뚜껑 또는 광학 접착 필름이 있는 96-웰 ​​반응 플레이트와 적절한 뚜껑이 있는 반응 튜브를 닫습니다.

4. 마이크로타이터 플레이트 로터가 있는 원심분리기에서 96-웰 ​​반응 플레이트를 약 2500rpm에서 30초 동안 원심분리합니다.

D. Real-Time PCR 기기 프로그래밍

다양한 Real-Time PCR 기기의 설정 및 프로그래밍에 관한 기본 정보는 해당 기기의 사용 설명서를 참조하십시오. 분석은 ABI7500 Real-Time PCR 시스템에 최적화되어 있습니다. PCR 실행은 아래 표에 설명된 대로 순환 조건으로 수행됩니다.

형광 검출기 정의

*기기의 형광 내부 참조를 "없음"으로 설정하십시오. 예를 들어: ABI 시리즈 기기의 경우 "수동 참조"를 "없음"으로 설정하십시오.

마. 데이터 분석

관련 기기의 작동 지침에 따라 분석 매개변수를 설정하고 데이터를 분석하십시오.

ABI 7500을 예로 들어 보겠습니다.

Baseline은 증폭 초기 주기에서 발견되는 배경 형광을 제거하되 증폭 신호가 배경 위로 상승하는 영역과 겹치지 않는 범위로 설정해야 합니다(시작 값:3~10; 종료 값: {{2} }). 주기 임계값(Ct)은 지수 위상의 기준에 있어야 합니다. "Analysis"를 클릭하면 자동으로 분석 결과를 얻고 "Report" 창에서 탐지 결과를 읽을 수 있습니다.

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